هیدر را پدر نظریه اسنادی دانسته اند. مقاله ای از او را می توان آغازی بر ادبیات مربوط به اسنادها دانست. در این مقاله، او اظهار داشت که در تعیین مکان (کانون) یک اسناد، مرتبط با مفهوم” ساخت واحد “می باشد(خداوردی،۱۳۸۳و میشل،۲۰۰۱).
بدین معنی که هم علل (ریشه ها) و هم اثرات، واحدهای علّی را تشکیل می دهند و با بررسی شباهت و نزدیکی بین ریشه ها و اثرات، استنباط ها یا اسنادهای مربوط به رویداد شکل می گیرند. او اعتقاد داشت که احتمال اسناد های شخصی بیشتر از اسنادهای موقعیتی است؛ زیرا معتقد بود که افراد” پیش الگوی ریشه ها^[۶۲]” هستند. این اظهارات باعث شکل گیری تحقیقات بسیاری در خصوص خطاها و سوگیری های اسنادی به علاوه اسناد مسئولیت پذیری شد. با توسعه ایده های هیدر و تدوین روان شناسی عامیانه یا پدیدارشناسی عوام ^[۶۳]سه قضیه بنیادی نشات گرفت: نخست، به منظور فهم رفتار افراد، باید فهمید که آنها محیط اجتماعیشان را چگونه درک و توصیف می کنند. دوم ، افراد در تلاش برای کنترل محیطشان و پیش بینی رفتار دیگران در پی محیطی با ثبات و قابل پیش بینی هستند. و سوم ، افراد به منظور فهم رفتار به کیفیت های مزاجی^[۶۴] فردی نگاه خواهند کرد(تقی پور،۱۳۷۸).

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

شکل۲-۱، مدل هیدر در مورد اسناد(تقی پور، ۱۳۷۸)
۲-۳-۳.نظریه استنباط های متناظر^[۶۵]
جونز^[۶۶] اظهار داشت که در رسیدن از اعمال به تمایلات^[۶۷]، یا به طور کلی استنباط شخصیت از رفتار، یک فعالیت همه گیر، با اهمیت فراوان برای همه ما می باشد. جونز و دیویس^[۶۸] برای تبیین چگونگی
استنباط مردم در مورد تمایلات یا ویژگی های شخصیتی افراد تلاش کردند(تقی پور،۱۳۷۸و سین،۱۹۹۱).
نظریه استنباط متناظر نه در تحقیقات اخیر روان شناسی اجتماعی به کار رفته است و نه در تحقیقات روان شناسی ورزش، با این وجود این نظریه مراحل مهمی از تاریخ نظریه ی اسنادی را تشکیل می دهد و لذا در جای خودش مهم می باشد. این نظریه همچنین می تواند چارچوب ادراکی مفیدی برای فهم فرایندهای اسنادی در ورزش از قبیل تعاملات عامل - شاهد(مثل ورزشکار- مربی) و سوگیری های اسنادی فراهم نماید(تقی پور،۱۳۷۸).
شکل۲-۲، مدل استنباط متناظر اسنادهای جونز و دیویس(تقی پور، ۱۳۷۸)
۲-۳-۴.اصل تغییر همگام^[۶۹]
دیدگاه کلی^[۷۰] و همکاران، دیگر دیدگاه بانفوذ در مورد اسنادها می باشد. کلی، اظهار داشت افراد با پردازش اطلاعات در مورد این که آیا با تغییر رویداد، اوضاع و شرایط همراه آن تغییر می یابد یا نه به علت آن رویداد پی می برند(تقی پور،۱۳۷۸و سین،۱۹۹۱).
اساسا در این نظریه، اعتقاد بر این است که سه نوع اطلاعات در ایجاد یک اسناد به کار برده می شود ۱) اطلاعات مربوط به توافق عام، یعنی رفتار فرد مورد نظر به علاوه سایر افراد، به طوری که رفتار فرد به چه میزان در سایرین دیده می شود. ۲) اطلاعات مربوط به ثبات، یعنی ثبات رفتار در طی زمان. ۳) اطلاعات مربوط به تمایز، یعنی رفتار مشاهده شده متمایز از رفتارهای مشابه است یا مرتبط با آنها برای مثال، اگر فردی از دویدن لذت می برد آیا صرفا از دویدن در پارک لذت می برد(تمایز بالا) یا از دویدن در جاهای دیگر هم لذت می برد ( تقی پور،۱۳۷۸).
با وجود سهم زیاد کلی در نظریه ی اسناد، نظریه ی او نیز در روان شناسی ورزش زیاد مورد توجه قرار نگرفته است.
پیامدهای اسنادی
رفتار
انگیزش
هیجان
پیشایندهای اسنادی
اطلاعات
انگیزش
باورها
اسنادها
دلایل/علل
درک شده
الف)عناصر
ب)ابعاد
شکل۲-۳، مدل فرایند اسنادی کلی و میکلا (۱۹۸۰)
۲-۳-۵.اسنادهای پیشرفت^[۷۱] وینر
سهم وینر در حوزه نظریه اسنادی به خصوص در حیطه فرایندهای اسنادی مرتبط با زمینه هایی که موفقیت و شکست در آن ها مورد بحث است، بسیار چشم گیر و مهم بوده است. اکثر تحقیقات مرتبط با ورزش، دیدگاه وینری را به کار برده اند. تحقیقات وی با بررسی پاسخ های اسنادی به موفقیت و شکست تحصیلی در کلاس درس شروع شد.
وینر و همکاران او با بهره گرفتن از تحلیل هیدر به عنوان یک مبنا، مفاهیم انگیزش موفقیت و کانون کنترل را برای ایجاد یک مدل طبقه بندی برای اسنادها و متعاقب آن یک مدل پیش بینی کننده برای پیامدهای اسنادها را گسترش دادند. این دیدگاه ها، اساسی برای تحقیقات اسنادی در ورزش ایجاد کردند. اگرچه وینر تنها شخص یا نخستین فرد پیشنهاد کننده مدل نظری اسناد نبود، اما او بهترین تئوری اسنادی را از لحاظ اهمیت ارائه داده است (دایان^[۷۲]، ترجمه بهرام و شفیع زاده،۱۳۸۳).
وینر با بهره گرفتن از کار اولیه به عنوان یک پایه، تئوری اسنادی رفتار پیشرفت را شکل داد. او اظهار کرد که افراد راجع به موفقیت ها و شکست هایشان اسنادهایی می سازند و این اسنادها بر انگیزش پیشرفت و رفتار موثر است. طبق این نظر وینر، پاسخ های افراد در جواب دلایل شکست و پیروزیشان احتمالا در یکی از این چهار طبقه جا خواهد گرفت (خداوردی،۱۳۸۳و دایان، ترجمه بهرام و شفیع زاده،۱۳۸۳).

1. 1. توانایی

1. 1. تلاش

1. 1. بخت واقبال

1. 1. دشواری تکلیف

در مدل اصلی، وینر اسنادها را همراه با دو بعد مکان علّیت و ثبات طبقه بندی کرد. مکان، یعنی اسناد برای مجری تا چه اندازه درونی یا بیرونی است. مثلا توانایی و تلاش درونی، و بخت و اقبال و دشواری تکلیف بیرونی هستند. ثبات به این بر می گردد که اسناد احتمالا در طول زمان تغییر می کند. توانایی و دشواری تکلیف، علل با ثبات هستند. بعدا وینر بعد سوم (قابلیت کنترل) را برای تمایز بین عواملی که درونی اند ولی خیلی قابل کنترل نیستند، (مثل تلاش شخصی)، به مدل خود اضافه کرد (دایان، ترجمه بهرام و شفیع زاده،۱۳۸۳). مدل وینر اشاره می کند که ثبات مهم ترین بعد اسنادی است و ثبات منجر به افزایش قطعیّت مربوط به نتایج آینده می شود (گوردون و راندال،۲۰۰۸).
مدل اسنادی رفتار و هیجان پیشرفت که اخیرا توسعه یافته، مدلی مناسب برای آزمودن نقش اسنادهای علّی در موقعیت های مرتبط با سلامتی را فراهم می کند. در این مدل وینر معتقد بود که اسنادهای علّی برای وقایع ونتایج، رفتار انگیزشی را از طریق تحت تاثیر قرار دادن پنداشت های مورد انتظار و پاسخ های عاطفی تغییرمی دهد(رودیسیل،۱۹۸۹).
نظریه اسنادی وینر(۱۹۸۵)، فرض کرد که تفکرات، آنچه ما احساس می کنیم و احساسات، آنچه را انجام می دهیم را تعیین می کنند. وینر تاکید می کند که اسناد علّی: الف) توسط نتایج متاثر می شوند (مثل پیروزی وشکست در ورزش)؛ ب) روی رفتارهای آینده اثر دارند، چرا که آن ها بر انتخاب و شدت و پایداری رفتار موثرند ( لی فول و همکاران، ۲۰۰۸).
نظریه وینر ریشه در نظریه پیشرفت اتکینسون^[۷۳](۱۹۶۵) دارد. نکته اصلی در نظریه اسناد وینر مشتمل بر شناخت علّی و معلولی و نیز رابطه اجزای علّت ها بر نتایج روان شناختی است. نظریه مورد نظر بر موضوعات و پدیده های متعدد و متفاوتی وابسته است که عبارتند از: حفظ عزت نفس، برنامه های پیشرفت متغییر، برنامه های تقویت، سر چشمه عواطف، یادگیری، ارزشیابی و علایق. گستردگی این نظریه به کاربردهای آن در حوزه هایی نظیر بی قراری، تسلط، تصمیمات قضایی، تنهایی، تعلّق و نیز افسردگی نمود بیشتری پیدا می کند(خداوردی،۱۳۸۳).
۲-۴.عناصر و ابعاد اسنادی
آخرین تقسیم بندی ابعاد اسنادی عبارتند از
۲-۴-۱.بعد منبع^[۷۴]
راتر^[۷۵](۱۹۶۶) و همکارانش، در طبقه بندی علّت ها پیشنهاد کرده اند که علل یا از درون فرد سرچشمه می گیرند یا از رویدادهای بیرونی. مشابه این نظر کسانی مانند هیدر (۱۹۸۵)، دچامز^[۷۶] (۱۹۶۸)، دسی^[۷۷] (۱۹۷۹) و وینر (۱۹۷۹)، طبقه بندی هایی بر اساس علّت های درونی یا بیرونی به عمل آورده اند. راتر این مفهوم را منبع کنترل نامید(خداوردی،۱۳۸۳).
افراد با منبع کنترل درونی کسانی هستند که معتقدند رویدادهای مثبت و منفی زندگی در نتیجه طرح ریزی دقیق و کوشش های پیگیر خود آن هابه دست می آید و برای اعمال و رفتار پیامد های ناشی از آن قبول مسئولیت می کنند. در مقابل افراد با منبع کنترل بیرونی کسانی هستند که میان رفتار خود و رویداد ها هیچ گونه رابطه علّت و معلولی نمی بینند و بخت واقبال، تصادف یا اشخاص دیگر را مسئول نتایج رفتار خود می دانند. در نتیجه برای اعمال و رفتار خود قبول مسئولیت نمی کنند (خداوردی،۱۳۸۳ و گرنیگون و دلویی،۲۰۰۳). وینر، معتقد است که منبع کنترل یک مفهوم واپسگرایانه است و به جای آن از اصطلاح منبع علّیت یاد می کند. وینر تاکید می کند که باید آن ها را ازهم جدا کرد. بعد مکان علّیت^[۷۸] یا منبع اشاره می کند به اینکه آیا علّت به طور درونی یا بیرونی برای فرد درک می شودیا نه؟(کافی و ریس،۲۰۰۷و لی فول و همکاران، ۲۰۰۸).
۲-۴-۲.بعد ثبات
ثبات بعدی است که مرتبط با مدت زمان درک شده علّت است (کافی و ریس،۲۰۰۷و لی فول و همکاران، ۲۰۰۸).
سلیگمن (۱۹۸۷)، بعد ثبات علّت ها را در یک مقیاس به دو صورت تغییرپذیر و تغییرناپذیر تعریف می کند (گرنیگون و دلویی،۲۰۰۳). این بعد توجیه کننده موفقیت ها یا شکست های زودگذر در برابر موفقیت ها و شکست های مزمن است. بنابراین عواملی چون توانایی و خانواده را می توان نسبتاً ثابت و تغییرناپذیر تلقی نمود. در حالی که عواملی مانند توجه و خلق، از ثبات کمتری برخوردارند. مثلا کوشش، از واقعه ای به واقعه دیگر، زیاد یا کم می شود؛ در حالی که خلق، یک حالت موقّت تلقی می شود. در نتیجه اجزای ادراکی یک علّت می تواند تغییر یابد. ثبات، تابعی از تغییر در نگرش ها از موقعیتی به موقعیت دیگر است. نکته اصلی بعد ثبات این است که اسنادهای ثابت (توانایی و سختی تکلیف) پیش بینی پذیرتر از اسنادهای غیر ثابت (تلاش وشانس) هستند (خداوردی،۱۳۸۳).

برای آزمون فرضیه ششم یعنی تعیین رابطه ابعاد شایستگی رهبر و اشتیاق شغلی ، از رگرسیون به روش گام به گام استفاده شده است. همان طوری که از جداول بالا بر می آید، تحلیل رگرسیون تا دو گام پیش رفته است یعنی متغیرهای تفکر استراتژیک و درستی وارد معادله شده که میزان همبستگی آن® درحالت اول با متغیر وابسته ۵۸۹/۰ است. میزان ضریب تعیین(R²) نیز در این مرحله برابر ۳۴۷/۰ است. در گام دوم با اضافه شده متغیر درستی شدت همبستگی به ۶۲۵/۰ افزایش یافت و میزان ضریب تعیین نیز ۳۹۰/۰ است بر اساس این ضریب تعیین ۳۹ درصد تغییرات متغیر وابسته(اشتیاق شغلی کارکنان)، به وسیله شایستگی رهبر(توسعه سازمان و درستی) تبیین می‌شود. میزان F نیز در جدول آنوا در سطح ۹۹ درصد(sig=0/000) معنی دار شده که حاکی از معنی دار بودن رگرسیون است.

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

۵- ۱) مقدمه
در این فصل از تحقیق، حاصل کار یعنی آنچه را در فصل چهارم بدست آمده با یافته ها و مطالعات و تحقیقات پیشین که در فصل دوم به آنها اشاره شده است، ترکیب شده و مورد بحث فرار می گیرد. در ابتدا نتایج حاصل از تحقیق ذکر میشود و به دنبال آن به ذکر پیشنهادات کاربردی و همچنین پیشنهاداتی برای تحقیقات آنی پرداخته می شود.
۵-۲) نتیجه گیری آمار توصیفی
۱) در حدود ۷۶ درصد از پاسخگویان مرد و مابقی زن می باشند و در حدود ۶۵ درصد دارای تحصیلات لیسانس به بالا هستند. همچنین در حدود ۸۰ درصد از پاسخ دهندگان در بازه سنی ۳۰ تا ۵۰ سال قرار دارند و سابقه شغلی نیز تقریبا به نسبت مساوی ۵۰ درصد، زیر ۱۵ سال و بالای ۱۵ سال، بین دو گروه تقسیم شده است.
۲) متغیر اشتیاق شغلی دارای میانگین ۴۵/۳ و حداقل نمره ۵۳/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده بیشتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت اشتیاق شغلی در جامعه مورد مطالعه بالاتر از حد متوسط است.
۳) متغیر شایستگی رهبر دارای میانگین ۳۵/۳ و حداقل نمره ۰۰/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده کمتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت شایستگی رهبر در جامعه مورد مطالعه بالاتر تر از حد متوسط است.
۴) متغیر بعد درستی شایستگی رهبر دارای میانگین ۴۷/۳ و حداقل نمره ۰۰/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده بیشتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت بعد درستی شایستگی رهبر در جامعه مورد مطالعه بالاتر از حد متوسط است.
۵) متغیر بعد تفکر استراتژیک رهبر دارای میانگین ۳۵/۳ و حداقل نمره ۰۰/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده بیشتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت بعد تفکر استراتژیک رهبر در جامعه مورد مطالعه بالاتر از حد متوسط است.
۶) متغیر بعد توسعه سازمان شایستگی رهبر دارای میانگین ۲۲/۳ و حداقل نمره ۰۰/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده بیشتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت توسعه سازمان شایستگی رهبر در جامعه مورد مطالعه بالاتر از حد متوسط است.
۷) متغیر بعد همکاری رهبر دارای میانگین ۲۲/۳ و حداقل نمره ۰۰/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده بیشتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت همکاری شایستگی رهبر در جامعه مورد مطالعه بالاتر از حد متوسط است.
۸) متغیر بعد خودآگاهی شایستگی رهبر دارای میانگین ۳۷/۳ و حداقل نمره ۰۰/۱ و حداکثر ۵ است. میانگین بدست آمده بیشتر از میانگین مورد انتظار(۳) است و این بدین معنی است که وضعیت خودآگاهی شایستگی رهبر در جامعه مورد مطالعه بالاتر از حد متوسط است.
۵-۳) نتایج آمار استنباطی
۱) در فرضیه اول تا پنجم پس از انجام آزمون ضریب همبستگی پیرسون مشخص گردید که با اطمینان ۹۵ درصد بین ابعاد شایستگی رهبر (درستی، تفکر استراتژیک، توسعه سازمان، همکاری و خودآگاهی) به تنهایی و اشتیاق شغلی کارکنان رابطه معنادار وجود دارد و ضریب همبستگی(شدت رابطه) به برتیب برابر ۵۵۹/۰، ۵۵۱/۰، ۵۸۹/۰، ۵۲۴/۰ و ۴۶۸/۰ است. در فرضیه ششم و پس از انجام آزمون رگرسیون مشاهده گردید که بین ابعاد شایستگی رهبر و اشتیاق شغلی نیز رابطه معنی دار وجود دارد و میزان ضریب تعیین نیز ۳۹ درصد است. جدول همبستگی نیز نشان می دهد که متغیرهای توسعه سازمان و درستی در سطح ۹۹ درصد (sig=0/000) معنی دار هستند. این در حالی است که میزان خطای سایر متغیرها بیشتر از ۰۵/۰ بوده‌اند و به همین دلیل از معادله رگرسیون خارج شده اند. بر اساس مقدار B در جدول همبستگی، معادله رگرسیون را می توان به شرح زیر نوشت:
Y = 29/697 + 1/150(توسعه سازمان) + ۰/۶۸۴(درستی)
بر اساس بتای به دست آمده ، به ازای یک واحد تغییر در انحراف معیار متغیر توسعه سازمان ، به اندازه ۳۸۸/۰ در انحراف معیار متغیر وابسته(اشتیاق شغلی)، به ازای یک واحد تغییر در انحراف معیار متغیر درستی به اندازه ۲۸۹/۰ در انحراف معیار متغیر وابسته(اشتیاق شغلی) تغییر ایجاد میگردد. بدین معنی که متغیر توسعه سازمان قوی ترین رابطه را با اشتیاق شغلی کارکنان دارد و متغیر درستی رهبر در مرتبه دوم قرار می گیرد.
۵-۴) بحث
لازم به ذکر است که تحقیقات اندکی در خصوص رابطه بین شایستگی رهبر و اشتیاق شغلی انجام شده که تحقیقات مشابه انجام شده و تحقیقات دیگر انجام شده در خصوص اشتیاق شغلی به شرح زیر است: تحقیقی برای دریافت پایان نامه دکترا با عنوان"رابطه بین شایستگی رهبری و اشتیاق کارمند” توسط استرود در ایالات متحده آمریکا صورت گرفته است. نتایج تحقیق نشان داده که بین شایستگی رهبر و اشتیاق کارمند رابطه مثبت وجود دارد. که نتایج این تحقیق مشابه تحقیق انجام شده در آمریکاست اما بین شایستگی‌های خودآگاهی رهبران با اشتیاق کارمند رابطه معناداری وجود ندارد که این فرضیه در تحقیق حاضر تایید شد(Stroud, 2009). همچنین در تحقیقی دیگر که با عنوان"شایستگی‌های مدیریت برای ارتقا اشتیاق کارمند” صورت گرفته است. نتایج پژوهش نشان داده که بین مدیریت شایسته و اشتیاق کارمند رابطه معناداری وجود دارد(Yaqoob et al, 2012) که نتایج تحقیق حاضر نیز هم راستا با تحقیق انجام شده است.
تحقیقی با عنوان"اعتبار مدیر ارشد، شهرت سازمانی درک شده و اشتیاق کارمند"صورت گرفته است. نتایج تحقیق نشان میدهد که اعتبار مدیر ارشدبا شهرت سازمانی درک شده و اشتیاق کارمند رابطه مثبتی داشته و شهرت سازمانی درک شده بر اشتیاق کارمند تاثیر مثبت و معناداری دارد. همچنین ادراک کارمند از شهرت سازمانی اثرات اعتیار مدیریت ارشد براشتیاق کارمند را تعدیل میکند(Men, 2012).
همچنین پژوهشی با عنوان"چگونه رابطه رهبر-پیرو،اشتیاق شغلی و تداوم مدیریت استراتژیک منابع انسانی عملکرد شغلی کارکنان هتل لوکس چینی را شرح می دهد” صورت گرفته است.نتایج نشان می دهد که رابطه رهبر-پیرو با عملکرد شغلی کارمند رابطه مثبتی داشته که با اشتیاق شغلی تعدیل می‌شود. تداوم مدیریت استراتژیک منابع انسانی رابطه بین رهبر-پیرو و اشتیاق شغلی را تقویت می کند(Li et al, 2012).
۵-۵) پیشنهادات تحقیق
پیشنهادات این پژوهش با توجه به نتایج و اهداف در نظر گرفته شده و همچنین به ترتیب فرضیات و بر اساس میانگین بدست آمده از سوالات پرسشنامه به شرح زیر است:
نتایج حاصل از فرضیه اول:
بر اساس تایید فرضیه اول تحقیق پیشنهاد می گردد که رهبران(مدیران) تلاش نمایند در بیان مطالب، واقعیت‌ها را به کارکنان منتقل نمایند و از بیان خلاف واقع و حرف نا راست اجتناب ورزند و با کارکنان زیر مجموعه شفاف و صریح بوده و جو اعتماد را بین آنان بوجود آورده و تقویت نمایند.
نتایج حاصل از فرضیه دوم:
بر مبنای نتایج حاصل از فرضیه دوم به مدیران بانک کشاورزی استان پیشنهاد میگردد تا جو و فضای خلاقیت ونوآوری را در بانک بوجود آورند و خود با ارائه راهکارهای نوآوران، پیشتاز کارکنان در این زمینه بوده و ابواب جمعی را نیز ترغیب به ارائه روش های نو در ارائه هر چه بهتر خدمت به مشتریان نمایند. همچنین توصیه می گردد که مدیران اهداف سازمانی را بنا بر اهمیت اولویت بندی نموده و کارکنان را نیز در جریان آن قرار داده و خود شخصا پیش بینی کننده و آغازگر تغییرات شود.
نتایج حاصل از فرضیه سوم:
یکی از امور مهم مدیران در سازمان شناسایی استعداد و قابلیت‌های کارکنان و مدیریت آن است که به مدیران توصیه اکید میگردد که البته این کار مستلزم ایجاد محیط مناسب برای جستجو و پرورش شیوه‌ها، سلایق، افکار و استعدادهای گوناگون است. مدیران باید به بر انگیختن و توانمند ساختن دیگران به انجام امور مورد همت گماشته و از پیشرفت دیگران بطور فعالانه حمایت نمایند.
نتایج حاصل از فرضیه چهارم:
به مدیران بانک کشاورزی پیشنهاد می گردد که برای همه کارکنان فرصتهای برابر شغلی فراهم نموده و در راستای استفاده از بهترین استعدادها،رقابت را در بین کارکنان تسهیل وارتباطات کاری استراتژیک در کلیه سطوح سازمان ایجاد نمایند. آنان باید الهام بخش کارکنان باشند و از هم افزایی ناشی از کار گروهی نهایت استفاده را به عمل آورند.

اجرای فعالیت­های سالیانه
دریافت بازخورد، بررسی ارزیابی و به­روز کردن سند برنامه استراتژیک (۲۹).
۲-۱-۲۱-۶-مدل برنامه­ ریزی استراتژیک گوداشتاین و همکاران
این مدل دارای ۹ مرحله است که شامل موارد زیر می­باشد:
برنامه­ ریزی برای برنامه­ ریزی استراتژیک

( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

شناسایی ارزش­ها
تدوین رسالت
مدل­سازی برای کارهای استراتژیک
ممیزی عملکرد
تحلیل شکاف
تدوین برنامه عملیاتی
برنامه­ ریزی و رویدادها
اجرا (۳۶).
۲-۱-۲۱-۷-مدل برنامه­ ریزی استراتژیک دانکن و همکاران
از ۵ مرحله تشکیل شده است که شامل:
تحلیل محیط داخلی
تحلیل محیط خارجی
تعیین رسالت و دورنمای آینده و ارزش­ها و اهداف سازمان
تنظیم استراتژی
کنترل می­باشد (۳۶).
۲-۱-۲۱-۸-مدل برنامه­ ریزی استراتژیک وایتمن
یکی از مدل­های ساده­ای که برای برنامه­ ریزی استراتژیک ارائه شده­ است مدل وایتمن است. بر اساس این مدل، برنامه­ ریزی استراتژیک از دو فاز مستقل برنامه­ ریزی و اجرا تشکیل می­ شود. در مرحله برنامه­ ریزی، عوامل داخلی و خارجی سازمان برای شناسایی وضعیت فعلی و طراحی وضعیت مطلوب مورد ممیزی قرار می­گیرد و این فاز با تدوین برنامه اجرایی عملیاتی خاتمه می­یابد. سپس در فاز دوم اجرا و پیگیری برنامه و اقدام اصلاحی ادامه می­یابد (۶).
۲-۱-۲۱-۹-مدل تیلور
به اعتقاد آقازاده (۱۳۸۲) این مدل برای سازمان­های بزرگ طراحی شده و شامل مراحل زیر است:
تعیین و تدوین اهداف آتی سازمان
شناخت اهداف و استراتژی­ های موجود در سازمان
تجزیه و تحلیل شرایط محیطی سازمان
تجزیه و تحلیل منابع و امکانات سازمان
شناخت وضع موجود
تعیین تغییرات مورد نیاز در استراتژی­ های گذشته
تصمیم ­گیری در خصوص استراتژی­ های مطلوب (۶).
۲-۱-۲۱-۱۰-مدل کاربردی
مدل کاربردی طبیبی و ملکی (۱۳۸۲) شامل موارد زیر است:
گام اول) برنامه­ ریزی: شامل توافق برای انجام برنامه­ ریزی استراتژیک، سازماندهی و تعیین ساختار مناسب، تشکیل تیم برنامه­ ریزی و تقسیم کار، اطلاع رسانی
گام دوم) تحلیل وضعیت موجود سازمان که شامل سه اقدام مستقل به شرح زیر است:
ارزیابی محیط داخلی سازمان: برای شناسایی قوت­ها و ضعف­های سازمان به بررسی نحوه عملکرد سازمان در گذشته و چگونگی عملکرد فعلی سازمان مبادرت می­ شود.
ارزیابی محیط خارجی سازمان: این کار به منظور شناسایی فرصت­ها و تهدیدهای سازمان در حوزه ­های اقتصادی، اجتماعی، فرهنگی، سیاسی، قانونی، دولتی و فن­آوری، و پیش ­بینی چگونگی تغییرات آتی محیط خارجی سازمان انجام می­گیرد.
شناسایی گروه ­های هدف سازمان و ذینفعان: از آنجا که سازمان­های خدماتی به ارائه خدمات به گروه ­های خاص جامعه مبادرت می­ کنند، شناسایی این گروه­ ها می ­تواند سازمان را در انجام رسالت خود و نیل به اهدافش یاری رساند.
گام سوم) تعیین رسالت، دورنما، ارزش­ها و اهداف کلی سازمان: تعیین این فعالیت­های کلیدی با توجه به اطلاعات حاصله از گام دوم صورت می­پذیرد.
گام چهارم) شناسایی مشکلات استراتژیک سازمان: این مشکلات شامل مسائل اساسی ناظر بر خط مشی سازمان هستند که به تعهدات، رسالت و ارزش­ها، سطح تولیدات یا خدمات تأثیر می­گذارند و نظرات ارباب رجوع، مشتریان، پرداخت­کنندگان مالیات، هزینه­ها، امور مالی، مدیریت یا طرح سازمانی را در هم می­آمیزد و تلفیق می­ کند.
گام پنجم) تعیین اهداف و مقاصد سازمان: اهداف، تلاش­ های لازم را برای نیل به موقعیت آینده، تحقق رسالت و دورنمای سازمان و تبدیل نتایج ارزیابی محیط داخلی و خارجی بر نتایج معنی­دار و مطلوب متمرکز می­نماید. مقاصد، اجزای قابل سنجش­تر و اختصاصی­تر برای نیل به اهداف هستند.
گام ششم) تدوین استراتژی­ های سازمانی: استراتژی­ها نشان می­ دهند نتایج چگونه حاصل خواهند شد و معمولاً در قالب روش، نگرش یا پاسخ هستند.
گام هفتم) انتخاب شاخص­ های سنجش و پایش عملکرد سازمان: در این مرحله به تعیین شاخص­ های مختلفی مانند شاخص داده یا ورودی، ستاده یا خروجی، نتیجه، کارایی و کیفیت برای اندازه ­گیری موفقیت در نیل به اهداف و مقاصد مبادرت می­ شود (۳۶).
۲-۱-۲۱-۱۱-مدل اسلک
این مدل برای سازمان­های ورزشی ارائه شده است. از نظر اسلک تدوین و اجرای برنامه استراتژیک شامل مجموعه ­ای از مراحل به هم وابسته است که این مراحل به شرح زیر است:

مشاوره افقی / تحرک درونی
توافق بر سر هنجارهای تکنوکراتیک/ روابط تعاونی
برخوردهای بسیار غیررسمی
باز بودن (شفافیت)

توزیع قدرت

آزادی عمل بالای دولت از جامعه/ تسلط دولت
گروه های ذی نفع جامعه هیچ نفوذی در دولت ندارند
هیچ تعادل یا همزیستی بین بازیگران وجود ندارد

آزادی عمل اندک دولت از جامعه/ تسلط پراکنده دولت
گروه های ذی نفع، جامعه هیچ نفوذی پراکنده در دولت دارند
تعادل یا همزیستی بین بازیگران وجود دارد

۲-۱-۴-گذار از حکومت شهری به حکمرانی شهری
تحولات اخیر در ساختار اجتماعی، اقتصادی و فضایی نواحی شهری، با تغییری در شیوه اداره شهرها همراه شده است که در متون مرتبط با بازساخت سیاسی شهرها، این نوع تحولات اغلب به عنوان حرکت از حکومت به حکمرانی تعریف می­ شود. اما با توجه به تفاوتی که میان این دو مفهوم وجود دارد نمی­ توان به منظور توجیه حرکت، واژه حکمرانی را جایگزین مفهوم حکومت کرد(لاله پور،۱۳۸۷،ص،۶۲)
استفاده از واژه حکمرانی به جای مفهوم حکومت بر این مسئله دلالت دارد که مدیریت شهری تنها وظیفه سازمان­های بخش عمومی نیست، بلکه ارتباطات بین عاملان حکومتی و غیرحکومتی را نیز در بر می گیرد که با الگوی حکومت متفاوت است(Rakodi, 2003).
در حقیقت، حکومت مبانی رسمی سازمانی را تهیه می­بیند در حالی که حکمرانی تدارک و روند آزمون مشارکت در اعمال قدرت عمومی است (پلرر و پیترز، ۱۳۸۶،ص،۴۴) حکومت مجموعه ­ای از نهادهای رسمی و حقوقی با قدرت قانونی است. اما «حکمرانی» نوعی فرایند است. این فرایند متضمن نظام به هم پیوسته­ای است که هم حکومت و هم اجتماع را در بر می گیرد. کل نگری و فراگیری همه ابعاد کنشگران و فرایندهای مؤثر بر حیات و توسعه شهری را می­توان خصلت غالب در تلاش ها و تحولات نظری مدیریت شهری دانست. این تحولات را در خلاصه­ترین شکل ممکن می­توان به صورت حرکت از الگوی پایه و قدیمی حکومت شهری به الگوی حکمرانی شهری تبیین و تعریف کرد(کاظمیان،۱۳۸۶،ص،۵) بنابراین دو مفهوم حکومت شهری و حکمرانی شهری را می­توان دو سر یک طیف تصور کرد که مبین نگرش ها و الگوهای بسیار متفاوت و متمایزی هستند که هر یک شکل و فرایند متفاوتی از مدیریت شهری را پدید می­آورند. (همان،ص، ۵)

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

پس حکومت و حکمرانی دو الگوی متفاوت در شیوه اداره شهرها هستند که تفاوت این دو ایده را می­توان به میزان قدرت ، نفوذ و صلاحیت سه عنصر دولت، بخش خصوصی و بخش مردمی (جامعه) در جامعه شهری نسبت داد(Rakodi,2001).
کانون توجه ایده حکمرانی، گروهی ازعوامل بیرون از سازمان­های رسمی دولتی است که تاکید عمده ­ای روی فرایندهای شبکه­ ای و مشارکتی دارد. در این الگو، ساختارهای شبکه­ ای جایگزین نظام­های اداری سیاسی از بالا به پایین حکومت شهری می­شوند و در درون شبکه‌ها نیز به جز نظام اداری سیاسی، عاملان دیگری از بخش­های خصوصی و داوطلبانه و سازمان­های همکاری وارد نظام می‌شوند (Astleithner and Hamedinger, 2003).
۲-۱-۵-اهداف حکمرانی شهری
هدف از حکمرانی شهری تقویت‌ فرایند توسعه‌ شهری‌ است‌ به گونه ­ای که‌ در جامعه‌، زمینه‌ و محیط‌ مناسبی‌ برای‌ زندگی‌ راحت‌ و کارآمد شهروندان، به‌تناسب‌ ویژگی­های‌ اجتماعی‌ و اقتصادی آنان‌ فراهم‌ شود. در مباحث گذشته به مفاهیم و روند شکل­ گیری حکمرانی شهری پرداخته شد که با توجه به روند ذکر شده بر پایه مفاهیم، می­توان اهداف کلان ذیل را برای حکمرانی شهری بیان کرد:
- بازساخت جامعه مدنی برای تقویت و اعتلای بیشتر سازمان­ها ، نهادها و جوامع محلی؛
- کاهش فقر و جدایی گزینی­های اجتماعی ، قومی و فرهنگی در شهرها؛
- افزایش مشارکت و مداخله افراد و صاحبان منافع در فرایندهای سیاسی درون شهرها؛
حکمروایی شهری به طور خاصتر نیز اهداف عملیاتی زیر را دنبال می کند:
- کاهش فساد؛
- بهبود کیفیت و افزایش امکان زندگی برای همه شهروندان؛
- حفظ دموکراسی؛
- ایجاد فرصت و امکان برای مردم به منظور نشان دادن خواسته ­ها و آمالشان در زندگی؛
- اعتلای امنیت، برابری و پایداری (UNDP
۲-۲-مدیریت شهری:
مفهوم مدیریت شهری اولین بار زمانی مورد توجه واقع گردید که در سال ۱۹۷۶میلادی در کنار مفاهیم دیگری چون توسعه پایدار شهری پروزه شهر سالم در دستور کار یکی از برنامه های توسعه سازمان ملل با عنوان برنامه مدیریت شهری قرار گرفت. مطرح شدن چنین مفهوم و اصطلاحی از مدیریت در قالب مدیریت شهری ناشی از حرکت شیوه مدیریت متمرکز به سمت مدیریت غیر متمرکز در چارچوب مدیریتهای محلی تر با هدف توسعه شهری بوسیله سازمانهای محلی می­باشد.
مدیریت شهری بعنوان چارچوب سازمانی توسعه شهر به سیاستها ،برنامه­ ها ،طرحها و اقداماتی مربوط میشود که در پی اطمینان از تطابق رشد جمعیت با میزان دسترسی به زیر ساخت­های اساسی زندگی شهری خصوصا مسکن و اشتغال می­باشد در چارچوب این تعریف کارایی مدیریت شهری وابستگی مشخص و مستقیمی به عوامل زمینه­ای از قبیل ثبات سیاسی ،وحدت .و یکپارچگی اجتماعی و برخی عوامل دیگر نظیر توان و مهارت و دانش سیاستگذاران ،تصمیم گیران و تصمیم سازان و نسز افراد استفاده کننده از این سیاستها و برنامه ها دارد .براین اساس ویزگیهای سازمانی مدیریت شهری و نیز نقش اجرایی بخش دولتی و عمومی در آن ،تاثیر بسزایی در موفقیت و یا عدم موفقیت آن ایفا می­نماید .
هدف کلان مدیریت شهری ایجاد محیطی قابل زندگی برای همه شهروندان همراه با عدالت اجتماعی ،کارایی اقتصادی و پایداری زیست محیطی می­باشد . براین اساس در شرایط فعلی مدیریت پایدار شهری با مدیریت شهری پایدار مطرح و مورد تاکید می­باشد .
مدیریت پایدار شهری حداقل استفاده از منابع تجدید ناپذیر ،پیشرفت در استفاده از منابع ­تجدید­پذیر ،ظرفیتهای جذب مواد زاید در سطوح جهانی و محلی ،کنترل و راهبری نحوه برآورده ساختن نیاز های اساسی انسان را در بر میگیرد .
مدیریت شهری پایدار به تمامی عرصه ­های فعالیت شهری و نیز به تمامی شهروندان و حضور آنان در مدیریت شهری اشاره دارد .به عبارتی دیگر شهر پایدار زمانی شکل می ­گیرد و کارآمدی خود را نشان میدهد که مشارکت و مداخله مردم را بصورت حقیقی و حقوقی به رسمیت بشناسد(.پرهیزکار، ۱۳۹۰،ص۳۳)
در رابطه با مفهوم و کارکرد مدیریت شهری چنین می­توان بیان کرد که مدیریت شهری بیشتر وجه فنی و اجرایی دارد و نسبت به حکومت شهری، جو حاکمیتی آن کمتر است و نهادهای مدیریتی شهر بیشتر مجری تصمیمات نهادهای حکومتی هستند که معمولاً در سطح ملی یا محلی مطرح شوند(آخوندی و همکاران، ۱۳۸۷،ص،۷۳)
هر چند رهیافت سنتی و متداول در مدیریت شهری بر مبنای تمرکزگرایی در سطح ملی و تمرکززدایی در سطح محلی، برنامه ریزی یکپارچه در سطح کلان ملی، برنامه ریزی بخشی میان مدت، نظام بسته و انحصار طلبانه دولتی، اقدامات واکنشی و تنظیم کننده وضع موجود با بهره گرفتن از راه­ حل­های فن­سالارانه استوار بوده اما در مقابل، رهیافت نوین اداره شهرها بر تمرکززدایی در سطح ملی و تمرکزگرایی در سطح محلی، نظام باز و کثرت طلبی در جامعه مدنی، اقدامات ابتکاری و تسهیل کننده وضع مطلوب، عمل اجتماعی و مشارکت فراگیر استوار است(طرح تحیقیقاتی طراحی نظام مطلوب مدیریت مجموعه­های شهری تهران، ۱۳۸۴).
بحث­های کلیدی درباره «بهترین » راه های اداره شهرها طیف وسیعی از موضوعات مختلفی چون مدل حکومت، قدرت شهردار، نحوه انتخاب شهردار (توسط شورا از میان اعضای آن یا خارج از شورا )، انتخاب شورا و شهردار (در روش‌های مختلف مستقیم، با رای یکپارچه شهروندان، با رای مجزای نواحی مختلف شهر و یا به صورت مرکب)، رای مخفی غیر حزبی، تعادل رابطه شورا و شهردار، مسؤولیت پذیری مدیر شهر و بی طرفی سیاسی را در برمی گیرد( Hall, 2005, P 211).
در این میان ساختار مدیریت شهری یکی از ابعاد بسیار مهم حکمرانی شهری محسوب می‌شود (Ibid, 212) .
۲-۲-۱-مدل­های مدیریت شهری
هر چند مشخصات و ساختار نهادهای قانونی اداره کننده شهر از کشوری به کشور دیگر تفاوت دارد و هر جامعه‌ای با توجه به ساختار اقتصادی، اجتماعی و سیاسی خود تعریف یا تلقی خاصی از مدیریت شهری دارد؛ وظایف کنونی مدیریت شهری (صرف‌نظر از تنوع و اختلاف در نظام­های اجتماعی و سیاسی گوناگون) تنها محدود به مواردی از قبیل برنامه‌ریزی، خدمات رسانی، مدیریت فرهنگ محلی، انجام پروژه‌های عمرانی و غیره نمی‌شود و جهت دهی فعالیت­های شهری و ترسیم چشم انداز شهر در راستای دستیابی به توسعه پایدار از جمله مهمترین وظایف مدیران شهری به شمار می‌رود (سعیدنیا ، ۱۳۸۳،ص،۴۴)
در میان دسته بندی­های مختلفی که در رابطه با مدل مدیریت شهری ارائه شده است می­توان به چهارگونه ساختار اداری و مدل اصلی اشاره کرد که با توجه به تقسیم مسئولیها به شرح ذیل عبارتند از : (Nallathiga, 2008, P 4)
۱-ساختار شورا –شهردار ضعیف
۲-ساختار شورا –شهردار قوی
۳-سیستم کمسیونی
۴-سیستم مدیر-شورا
۲-۲-۲-تعریف حکومت محلی و سازمان محلی
حکومت یا دولت به طور کلی به تشکیلات و نهادهایی اطلاق می شود که وقتی توسط مردم یک محل ( به نام حکومت محلی ) یا مردم یک منطقه ( به نام حکومت ایالتی ) و یا مردم یک کشور ( به نام حکومت مرکزی یا فدرال ) ایجاد گردید و مردم نمایندگانی را از طرف خود برای نظارت و تصمیم گیری در امور آن انتخاب کردند ، در هیچ مورد نیازی به کسب اجازه از یک واحد حکومتی دیگر و یا گزارش دادن به واحد حکومتی دیگر نداشته باشد. این روش در کشورهایی که از سیستم عدم تمرکز پیروی می کنند ، رایج است . (هاشمی ، ۱۳۷۱، ص،۲۳)
۲-۲-۳-انواع سازمان های محلی
به طور کلی سازمان های محلی را دو دسته عمده ( شورای شهر و شهرداری برای اداره کردن امور شهرها ) و تشکیلات اداری روستایی ( برای اداره کردن امور روستاها ) می توان تقسیم نمود. لکن نهادهای دیگر از جمله شوراهای بخش و شهرستان و تشکیلات اداری مرتبط با آنها را نیز می توان جزء سازمان های محلی محسوب نمود. زیر خدماتی که معمولاً به عهده آنها محول می گردد مربوط به سطح وسیعی از تقسیمات اقلیمی کشور نبوده و جنبه محلی دارد.
۱- شهرداری ها ( Municipality )
شهرداری ها را کاملترین سازمان محلی می توان محسوب داشت. در کشور ما نیز اگر چه شهرداری ها شدید تحت کنترل و نظارت حکومت مرکزی و همچنین استانداران و فرمانداران و بخشداران می باشند . قسمت قابل ملاحظه ای از درآمد آنها توأم با مالیات و حقوق و عوارض گمرکی توسط سازمان های دولتی وصول و به آنها تحویل گردد و از کمک های بلاعوض عمرانی استفاده می کنند . ولی چون اولاً تصویب بسیاری از آنها امور آنها از جمله تصویب بودجه و عوارض وصولی آنها به عهده شورای شهر بوده و ثانیاً حساب درآمد و هزینه هر یک از آنها جداگانه توسط خود آنها نگاهداری می شود و ثالثاً عهده دار تعداد قابل ملاحظه ای از خدمات محلی مورد احتیاج ساکنان شهرهای می باشند ، لذا می توان آنها را در مقایسه با سایر کشورها کاملترین سازمان های محلی در ایران دانست . (سعیدنیا ،۱۳۷۹ ،ص،۱۲۳ )
۲- شورای شهر( City Council)
سیستم مدیریت شهری در ایران اقتباس از سیستم ( شورای شهر – شهردار ) است که سیستم خوبی در جهان و از اوایل قرن بیستم ابداع گردیده است و اکنون در بسیاری از کشورهای جهان رایج است. در این سیستم مردم شهر عده ای را به نمایندگی شورای شهر انتخاب می کنند و سپس شورای مذکور، شخص واجد شرایط و متخصصی را به عنوان شهردار استخدام و منصوب نموده ، اداره امور شهر را به عهده او واگذار و برنامه فعالیت ها و عملیات شهرداری و منابع درآمد و طرز به مصرف رسانیدن آن را تصویب ، در پیشرفت کارهای شهرداری نظارت به عمل می آورد.

mg 2-1

Bromophenol blue

۳-۲-۴-۸- تهیه محلول رنگ آمیزی کوماسی بلو
کوماسی بلو رنگی است که با برهمکنش های واندروالس و الکترواستاتیک به گروه NH₃ ⁺ پروتئین ها متصل می شود. برای تهیه این محلول ۱/۰ گرم پودر کوماسی بلو R-250 در۳۰ میلی لیتر استیک اسید و ۶۰ میلی لیتر آب مقطر حل می شود. باند های پروتئینی بر روی ژل با رنگ آمیزی به وسیله این محلول به رنگ آبی نمایان می شوند.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۳-۲-۴-۹- تهیه محلول رنگ زدای کوماسی بلو
از این محلول برای رنگ زدایی کوماسی بلو از ژل پلی آکریل آمید استفاده می شود. برای تهیه ۱۰۰ میلی لیتر از این محلول، ۱۰ میلی لیتر استیک اسید خالص و ۳۰ میلی لیتر اتانول با ۶۰ میلی لیتر آب مقطر مخلوط می شوند.
۳-۳- روش های استفاده شده در این پژوهش
۳-۳-۱- تخلیص آلفا کریستالین
برای خالص سازی پروتئین آلفا کریستالین از لنز گاو به روش کومار و همکاران عمل شد. به طور خلاصه، تعدادی لنز چشم تازه گاو تهیه شد. پس از جداسازی کپسول پوشاننده ی سطح این لنزها بخش کورتکس جدا شده در بافر تریس ۸pH ، حاوی ۱۰۰ میلی مولار نمک سدیم کلرید، ۵/۰ میلی مولار ^[۸۳]EDTA، %۰۱/۰ سدیم آزید و ۱۰ میلی مولار بتا مرکاپتو اتانول تحت سرما هموژنیزه گردید. سانتریفیوژ نمونه های هموژنیزه شده در در دمای ۴ درجه سانتی گراد و با دور g10000 انجام شد. سپس قسمت محلول نمونه ها که حاوی کل پروتئین های لنز چشم می باشد از بخش ته نشین شده جدا گردید. به منظور خالص سازی آلفا کریستالین لنز چشم، این محلول (حجم یک میلی لیتر) به ستون کروماتوگرافی فیتراسیون ژلی حاوی ماتریکس سفاکریل S-300 که قبلا با بافر (تریس ۸ pH) به تعادل رسیده بود منتقل شد. محلول خروجی با سرعت جریان ۲۵/۰ میلی لیتر بر دقیقه در لوله های آزمایش جمع آوری شد. در ادامه تعیین غلظت نمونه های خارج شده از ستون کروماتوگرافی با روش برادفورد صورت گرفت. پس از تعیین غلظت، نمونه های پروتئینی به ژل آکریل آمید (۱۲درصد) منتقل شد. نمونه های حاوی آلفا کریستالین نیمه خالص تغلیظ و مجددا به ستون سفاکریل S-300 منتقل شد و تحت همان شرایط قبلی خالص سازی انجام گرفت تا پروتئین های آلفا کریستالین با درصد خلوص بالا به دست بیاید. نهایتا محلول های حاوی آلفا کریستالین خالص شده با ژل آکریل آمید (۱۲درصد)، ابتدا بر علیه آب مقطر و سپس بر علیه بافر فسفات دیالیز شد و در ادامه برای مطالعه فعالیت چاپرونی استفاده شد.
۳-۴- روش های تحقیق
۳-۴-۱- فرایند استیلاسیون هورمون انسولین پانکراس گاوی با آسپیرین
استیلاسیون هورمون انسولین ضمن انکوباسیون با آسپیرین به مدت ۲۰ و ۳۶ روز انجام گرفت. نمونه انسولین با غلظت ۲ میلی گرم در میلی لیتر در حضور غلظت ۱۵ میلی مولار آسپیرین و در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد در شرایط استریل انکوبه شد. انسولین و آسپیرین هر دو در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷ pH حل شدند. تمامی مراحل انکوباسیون در زیر هود لومینار که از قبل با الکل و پرتو فرابنفش استریل شده بود، صورت گرفت. نمونه های پروتئین و آسپیرین با فیلتر سرنگی ۲/۰ میکرومتر فیلتر شد. همچنین پروتئین انسولین بدون حضور آسپیرین در شرایط یکسان جهت استفاده به عنوان نمونه کنترل انکوبه شد. پس از سپری شدن زمان انکوباسیون به منظور حذف مولکول های آسپیرین واکنش نداده با پروتئین، نمونه های پروتئینی استیله شده علیه بافر فسفات به مدت ۲۴ ساعت به وسیله ی کیسه دیالیز دارای cut-off برابر ۳ کیلو دالتون دیالیز شد.
۳-۴-۲- الکتروفورز ژلی هورمون انسولین استیله و غیر استیله به منظور بررسی میزان استیلاسیون و تشکیل توده های پروتئینی با وزن مولکولی بالا
در این پژوهش نمونه های انسولین در حضور و عدم حضور آسپیرین با غلظت ۱۵ میلی مولار در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷ pH به مدت ۲۰ و ۳۶ روز در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه شد. بعد از اتمام زمان انکوباسیون ۲۰ میکروگرم از هر نمونه پروتئینی به درون چاهک های ژل طبیعی و SDS-PAGE در شرایط احیایی و غیر احیایی (ژل ۱۸ درصد) برای بررسی حدواسط های با وزن مولکولی بالا منتقل شد. لازم به ذکر است که بافر انتقال ژل طبیعی فاقد SDS می باشد. باندهای پروتئینی بعد از رنگ آمیزی ژل با کوماسی بلو R₂₅₀ و محلول رنگ بر حاوی ۱۵ در صد متانول و ۱۰ در صد اسید استیک شناسایی شد.
۳-۴-۳- تعیین گروه های آمین آزاد/ غیر واکنش دهنده در هورمون انسولین
برای نشان دادن میزان استیلاسیون هورمون انسولین با آسپیرین، از دو روش OPA و فلورسامین استفاده شد. این روش های سنجش بر اساس واکنش بین دو ترکیب با گروه های آمین آزاد غیر واکنش دهنده (α و ε ) انجام می گیرد. روش کار با OPA به این صورت است که ۱۰۰ میکرولیتر از نمونه های پروتئینی (استیله و غیر استیله) با غلظت ۲ میلی گرم در میلی لیتر به ۱ میلی لیتر محلول تازه تهیه شده آن اضافه شد. بعد از گذشت۲ دقیقه انکوباسیون در دمای اتاق میزان جذب نمونه ها به وسیله ی دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج ۳۴۰ نانومتر اندازه گیری شد. از محلول OPA برای صفر کردن دستگاه استفاده شد. تمامی آزمایش ها به صورت سه بار تکرار انجام شد. گروه های آمین آزاد نمونه های انسولین استیله و غیر استیله با روش سنجش فلورسامین نیز بررسی گردید. در این روش بر اساس نشر فلورسانس ترکیب فلورسامین می توان میزان استیله شدن پروتئین انسولین به وسیله آسپیرین را بررسی کرد. در این مطالعه مقدار ۲۵ میکرومتر از هر نمونه پروتئینی با غلظت ۱ میلی گرم در میلی لیتر با ۵۰۰ میلی لیتر بافر فسفات ۵۰ میلی مولار و ۲۲۵ میکرولیتر آب مقطر مخلوط شد. در نهایت مقدار ۲۵۰ میکرولیتر از محلول فلورسامین به آن اضافه شد. محلول فوق به مدت ۱۰ دقیقه در تاریکی انکوبه شده و سپس نشر آن به وسیله دستگاه فلورسانس مطالعه شد. طول موج برانگیختگی در۳۹۰ نانومتر تنظیم شد و طیف نشری
نمونه ها در محدوده طول موج های ۴۰۰ تا ۶۰۰ نانومتر جمع آوری گردید که البته طول موج ۴۹۰ نانومتر به عنوان بیشینه ی نشر مدنظر بود. همچنین شکاف های برانگیختگی و نشری فلورسانس در این مطالعه به ترتیب ۵ و ۱۰ نانومتر انتخاب شد.
۳-۴-۴- مطالعه فلورسانس ذاتی هورمون انسولین در حضور آسپیرین
در این پژوهش هم فلورسانس ذاتی^[۸۴] و هم فلورسانس محیطی^[۸۵] (عارضی) برای مطالعه ی تغییرات ساختاری پروتئین انسولین استفاده شد. برای بررسی تغییرات ساختار سوم پروتئین ها متاثر از عوامل محیطی، به نظر می رسد روش نورسنجی فلورسانس روش مناسب و کارآمدی باشد. در روش مطالعه فلورسانس، مولکول ها اغلب به حالت تهییج رفته و سپس ضمن برگشت به حالت پایه بخشی از انرژی را به صورت نشر فلورسانس از دست می دهد. طیف نشری همواره دارای انرژی کمتر و دامنه طول موج بزرگتر در قیاس با طول موج محرک اولیه است، زیرا ضمن برگشت مولکول از حالت تهییج^[۸۶] به یکی از سطوح ارتعاشی حالت پایه، بخشی از انرژی به صورت گرما و بخش دیگر به صورت نشر فلورسانس رها می شود. شدت فلورسانس اغلب با واژه بازده کوانتومی بیان می شود. بازده کوانتومی را با نماد تک حرفی و اختصاری Q و به صورت زیر نشان می­ دهند.
معادله ی ۳-۲ تعداد فوتون جذبی/ تعداد فوتون نشری Q =
دو عامل داخلی و خارجی اغلب شدت فلورسانس (Q) را متاثر می کنند. خاصیت نشر فلورسانس مولکول ها اغلب در محیط آبی فروکش می شود. بر عکس در محیط های غیر قطبی یا محیطی با شرایط اتصال محکم این پدیده تشدید می گردد. هم فرایند فروکش^[۸۷] و هم تشدید فلورسانس اطلاعات با ارزشی را در خصوص ساختار و عملکرد پروتئین در اختیار می گذارند. برخی مولکول ها دارای فلورسانس ذاتی هستند. در پروتئین ها شاخه جانبی اسیدهای آمینه ی آروماتیک فنیل آلانین، تیروزین و تریپتوفان و همچنین کوآنزیم های نظیر NAD و FAD و در اسیدهای نوکلئیک حلقه های پورپنی و پیریمیدینی دارای خاصیت فلورسانس ذاتی می باشند (Liu و همکاران ۲۰۰۰). در پروتئین ها فلورسانس ذاتی اغلب به منظور مطالعه تغییرات ساختار فضایی و همینطور موقعیت جایگاه های فعال و همچنین موقعیت کوآنزیم ها استفاده می شود.
در این مطالعه همه اندازه گیری های فلورسانس در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷pH ، در دمای۳۷ درجه سانتی گراد و به کمک دستگاه اسپکتروپولاریمتر (مدل Cary-Eclips ساخت کشور استرالیا) انجام شد. این دستگاه دارای لامپ زنون و گزارش گر داده ای DR3 بود. هم نمونه های انسولین غیر استیله (کنترل) و استیله رقیق شدند و غلظت آن ها قبل از اندازه گیری فلورسانس ذاتی به ۴/۰ میلی گرم بر میلی لیتر رسید. انسولین فاقد اسید آمینه آروماتیک است و از این رو وقتی این پروتئین در طول موج ۲۹۵ نانومتر برانگیخته شود، فاقد نشر در محدوده ی طول موج ۳۰۰ تا ۵۰۰ نانومتر می باشد. برانگیختگی انسولین در طول موج ۲۷۶ نانومتر (به علت داشتن ۴ تیروزین) دارای نشر قابل توجه در محدوده ی طول موج بین۲۸۰ تا ۳۸۰ نانومتر می باشد و از این خاصیت برای بررسی فلورسانس ذاتی این پروتئین استفاده شد (Menendez و همکاران ۱۹۶۹). در این پژوهش شکاف برانگیختگی و نشری فلورسانس به ترتیب ۵ و۱۰ نانومتر بود.
مطالعات فلورسانس ذاتی برای بررسی تغییرات ساختاری پروتئین کاربرد دارد و کاهش شدت فلورسانس، نشان دهنده حرکت اسید آمینه آروماتیک به سطح قطبی است. درنتیجه اگر در شرایط خاص (دما، اتصال لیگاند یا تغییرات pH) شدت فلورسانس کاهش یابد، نشان دهنده این است که اعمال این شرایط باعث باز شدن پروتئین می شود. در صورتیکه افزایش شدت فلورسانس، نشان دهنده حرکت اسید آمینه آروماتیک به بخش غیرقطبی و داخلی پروتئین است.
۳-۴-۵- مطالعه فلورسانس عارضی هورمون انسولین در حضور آسپیرین
برای بررسی مولکول هایی که واجد گروه فلور ذاتی نیستند از ترکیبات خارجی موسوم به فلور عارضی استفاده می شود. در این حالت نشر فلورسانس را فلورسانس عارضی می نامند. فلور عارضی مولکولی است که به سیستم بیوشیمیایی به منظور ایجاد نشر فلورسانس اضافه می شود. بنابراین افزودن یک ماده فلورسانس به ماکرومولکول برای مطالعه ی آرایش فضایی را مطالعه فلورسانس محیطی یا عارضی آن نیز می گویند.
مطالعه ی فلورسانس عارضی انسولین در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷pH و در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و به وسیله ی دستگاه اسپکتروپولاریمتر (مدل Cary-Eclipsساخت کشور استرالیا) انجام شد. در مطالعه فلورسانس عارضی از ترکیب فلور ANS استفاده شد. غلظت نهایی انسولین و ANS، در نمونه های انسولین استیله و غیر استیله به ترتیب ۴/۰ میلی گرم بر میلی لیتر و ۵۰ میکرومولار بود. نمونه های فوق پس از ۳۰ دقیقه انکوبه در تاریکی و در دمای اتاق به کُوِت فلورسانس منتقل شدند. آنگاه هر نمونه در طول موج ۳۶۵ نانومتر برانگیخته شد و طیف های نشری در محدوده طول موج ۴۰۰ تا ۶۰۰ نانومتر جمع آوری شد.
شکل ۳-۷- دستگاه فلورسانس Cary-Eclips.
۳-۴-۶- بررسی تشکیل فیبر آمیلوئیدی هورمون انسولین در حضور آسپیرین با بهره گرفتن از آزمون فلورسانس تیوفلاوین T (ThT) و آزمون اسپکتروسکوپی سنجش جذب کنگورد
به منظور مطالعه تشکیل فیبر آمیلوئید از رنگ تیوفلاوین T استفاده شد. در صورت تشکیل فیبر این ساختار در طول موج ۴۸۵ نانومتر دارای بیشینه نشر (Fmax) خواهد بود. این پژوهش به کمک دستگاه اسپکتروپولاریمتر (مدل Cary-Eclips) و در دمای ثابت ۳۷ درجه سانتی گراد انجام شد. بافر استفاده شده در این پژوهش بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷ pH بود. در این مطالعه غلظت نهایی تیوفلاوین T و نمونه های پروتئینی به ترتیب ۲۰ میکرومولار و ۱۵/۰ میلی گرم در میلی لیتر بود. هر نمونه در طول موج ۴۴۰ نانومتر برانگیخته شد و طیف نشری آن در محدوده بین طول موج ۴۵۰ تا ۶۰۰ نانومتر جهت مطالعه تاثیر استیلاسیون بر فیبریلاسیون هورمون انسولین گزارش شد.
روش دیگر برای بررسی وجود فیبر آمیلوئید در محیط استفاده از رنگ کنگورد می باشد. طیف جذبی کنگورد به تنهایی در ۴۹۸ نانومتر دارای بیشینه است که با اتصال کنگورد به فیبر آمیلوئیدی دارای جآبجایی به سمت طول موج های و افزایش جذب است. در این پژوهش غلظت ۱۰ میکرومولار محلول کنگورد به نمونه های پروتئینی با غلظت ۱۵/۰ میلی گرم در میلی لیتر اضافه گردید و سپس به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق در شرایط تاریکی انکوبه شد. پس از ۱۵ دقیقه طیف جذبی هر نمونه بین طول موج۴۰۰ تا ۶۰۰ نانومتر با بهره گرفتن از دستگاه اسپکتروفتومتر خوانده شد.
۳-۴-۷- بررسی توده ای شدن پروتئین انسولین استیله و غیر استیله
مطالعه سنیتیک توده ای شدن نمونه های انسولین استیله و غیراستیله با افزودن ۲۰ میلی مولار DTT در دمای ۴۰ درجه سانتی گراد و به مدت ۱۵ دقیقه در طول موج ۳۶۰ نانومتر به وسیله دستگاه اسپکتروفتومتر انجام گرفت. تمامی آزمایش ها در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷ pH انجام شد.
۳-۴-۸- مطالعه اثر استرس های شیمیایی و فیزیکی در القاء تشکیل فیبر آمیلوئیدی انسولین استیله و غیر استیله
انسولین در حضور و عدم حضور آسپیرین ۱۵ میلی مولار به مدت ۲۰ روز در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه شد. در این پژوهش از مواد شیمیایی نظیر اوره، TFE و EDTA به عنوان استرس شیمیایی استفاده شد. نمونه های پروتئینی با غلظت ۲ میلی گرم در میلی لیتر در حضور اوره ۳ مولار و TFE 10 درصد در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷ pH در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد طی ۱۵ ساعت انکوبه گردید.
در مطالعه دیگر نمونه های انسولین استیله و غیراستیله (۲ میلی گرم در میلی لیتر) در حضور غلظت ۲ میلی مولار ترکیب EDTA به مدت ۱۲۰ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه شدند.
به منظور بررسی استرس فیزیکی، نمونه های پروتئینی با غلظت ۲ میلی گرم در میلی لیتر در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار به مدت ۲ ساعت در دمای ۶۰ درجه سانتی گراد قرار گرفت.
برای مطالعه تشکیل فیبر آمیلوئید از رنگ تیوفلاوین T استفاده شد. این پژوهش به کمک دستگاه اسپکتروپولاریمتر (مدل Cary-Eclipsساخت کشور استرالیا) و در دمای ثابت ۳۷ درجه سانتی گراد انجام شد. در این آزمایش غلظت رنگ تیوفلاوین T و انسولین به ترتیب ۲۰ میکرومولار و ۱۵/۰ میلی گرم در میلی لیتر بود. پس از انتقال نمونه ها به کوت فلورسانس، هر نمونه در طول موج ۴۴۰ نانومتر برانگیخته و طیف های نشری در محدوده بین طول موج ۴۰۰ تا ۶۰۰ نانومتر گزارش شد.
۳-۴-۹- مطالعه جلوگیری از توده ای شدن هورمون انسولین استیله و غیر استیله با چاپرون های بتا کازئین و آلفا کریستالین
انسولین پانکراس گاوی (۲ میلی گرم در میلی لیتر) در حضور و غیاب آسپیرین در بافر فسفات ۱۰۰ میلی مولار با ۴/۷ pH به مدت ۲۰ روز در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه شد. توده ای شدن نمونه های پروتئینی با غلظت ۲۰ میلی مولار DTT القاء شد. اندازه گیری میزان جذب نمونه های ذکر شده در طول موج ۳۶۰ نانومتر انجام پذیرفت. به منظور جلوگیری از فرایند توده ای شدن از پروتئین های چاپرونی بتا کازئین و آلفا کریستالین با غلظت های ۰۵/۰ ، ۱/۰ و ۲/۰ میلی گرم درمیلی لیتر استفاده شد.
۳-۴-۱۰- مطالعه ساختار دوم انسولین به روش دو رنگ نمای دورانی در حضور آسپیرین
دو رنگ نمای دورانی^[۸۸] (CD) روشی مبتنی بر طیف سنجی است که بر اساس تفاوت در میزان جذب نور قطبیده راست دوران کننده و نور قطبیده چپ دوران کننده به وسیله ملکول فعال از لحاظ نوری استوار است. از این روش برای بررسی ساختار پلیمرهای زیستی مانند پروتئین و اسیدهای نوکلئیک استفاده می‌شود.
به منظور بررسی اثر استیلاسیون روی ساختار دوم انسولین از محدوده ی دور فرابنفش (Far-UV CD) یعنی طول موج ۱۹۰ تا ۲۶۰ نانومتر به کمک دستگاه CD (مدل۲۱۵ Aviv، ساخت کشور آمریکا) مجهز به سیستم دمایی استفاده گردید. قبل از اندازه گیری CD، همه نمونه های پروتئینی مربوطه رقیق شدند به طوری که غلظت آن ها به ۲/۰ میلی گرم در میلی لیتر رسید. سپس هر یک از این نمونه ها به داخل کُوِت مناسب مطالعات CD منتقل شد. تمام اندازه گیری ها در دمای ۲۷ درجه سانتی گراد انجام شد.
با در نظر گرفتن ۵۱ اسید آمینه و وزن مولکولی ۵۷۰۰ دالتون برای انسولین پانکراس گاوی نتایج به صورت بیضیت مولاری^[۸۹] بر اساس معادله ی ۳-۳ گزارش شد (Bandyopadhyay و همکاران ۲۰۰۰).
معادله ی ۳-۳ [θ]_λ= (۱۰۰ . (MRW) . [θ]_obs /Cl)
در معادله فوقθ_obs ، بیضیت مشاهده شده در طول موج معین،C غلظت پروتئین بر حسب میلی گرم در میلی لیتر و L طول مسیر نور بر حسب سانتی متر است. MRW، میانگین وزن باقی مانده های اسید آمینه ای است که به طریق M/(N-1) محاسبه می شود. M و N به ترتیب وزن مولکولی زنجیره پلی پپتیدی و تعداد اسیدآمینه ها در زنجیره ی پلی پپتیدی می باشد. در آخر بیضیت های مشاهده شده از بیضیت بافر کم شد و نتایج بدست آمده به وسیله نرم افزار ^[۹۰]CDNN آنالیز شد. آنگاه میزان ساختارهای دوم بر اساس درصد محاسبه شد.
شکل ۳-۸- نمایی از دستگاه دورنگ نمای دورانی۲۱۵ Aviv.
۳-۴-۱۱- مطالعه هورمون انسولین به روش دستگاه پراکندگی پویای نور در حضورآسپیرین