۴-بالن
۵-آب مقطر
۶- ویال
۳-۱-۳-۲- روش انجام کار
برای اسانس گیری ابتدا ۱۰۰ گرم گیاه توزین و درون بالن یک لیتری قرار گرفت. سپس بالن تا نیمه پر از آب شد و درون هیتر گذاشته شد و دستگاه کلونجر به آن وصل گردید.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))
درون دستگاه مقداری آب ریخته شد تا بعداً وقتی اسانس خارج گردید روی همین آب قرار گیرد. سپس شیر آب سرد نیز باز شد تا آب سرد به صورت مداوم جریان داشته باشد. هیتر روی دمای ۱۰۰ درجه سانتی گراد تنظیم شد تا آب درون بالن به جوش آید. از زمانی که آب به جوش آمد ۲ ساعت فرصت داد شد تا اسانس از گیاه خارج شد. سپس دستگاه خاموش و به حال خود گذاشته تا خنک شد. اسانس تولید شده در ظرف شیشهایی ریخته شد و پس از بسته شدن درب آن تا زمان استفاده در درون یخچال ۴+ درجه سانتی گراد قرار داده شد. جهت جدا کردن آب موجود در اسانس از سدیم سولفات انیدر استفاده شد.
این روش در مورد اسانس هایی به کار برده می شود که در اثر جوشانیدن با آب، آسیب ندیده و تخریب نشود. زمانی که آب به جوش می آید اسانس داخل گیاه به همراه آب بخار می شود و زمانی که به مبرد میرسد چون آب سرد درون مبرد جریان دارد، هر دو به فاز مایع تبدیل میشوند و به درون استوانه میریزند. آب پایین قرار میگیرد و روی آن یک لایه روغنی اسانس قرار میگیرد.
آب درون بالن هیچگاه خشک نمی شود. زیرا یک رابط وجود دارد که هر چه آب سر ریز می کند دوباره به درون بالن بر میگردد. آبی که زیر اسانس قرار دارد درصد بسیار کمی از اسانس را در خود حل کرده است و عرق یا آب مقطر (Aromatic water) نام دارد. با خارج کردن این عرق اسانس خالص که روی آن قرار داشته بدست می آید. از هر ۱۰۰ گرم گیاه آویشن شیرازی حدوداً ۳ سی سی اسانس بدست آمد.
۳-۲- آزمونهای میکروبی
در این تحقیق اثر اسانس و عصاره آویشن شیرازی و نانو ذرات نقره به صورت جداگانه و ترکیبی بر روی ۵ سوش میکروبی بیماریزا آزمایش گردید. برای تعیین اثرات ضد میکروبی از روش انتشار چاهکی استفاده شد. برای این کار ابتدا باکتری ها بر روی محیط مناسب کشت داده شد و سپس درون محیط کشت چاهک ایجاد گردید. غلظتهای مختلفی از هر کدام از نمونهها آماده شد و با حجم مشخص درون چاهکها قرار داده شد. سپس این مجموعه در انکوباتور با دمای مناسب (۳۵-۳۷ درجه سانتی گراد) قرار گرفتند و بعد از گذشت مدت زمان لازم برای رشد میکروارگانیسم (۲۴-۱۸ ساعت) آنها را بیرون آورده و مورد بررسی قرار گرفتند. لازم به توضیح است که به علت فرار بودن اسانس به محض آماده کردن اسانس و غلظتهای مختلف آن باید درون چاهک ریخته شود، در صورتی که در اطراف چاهک میکروارگانیسم‌ها کاملاً رشد کرده باشند اسانس، عصاره گیاه و نانو ذره نقره و ترکیب آنها اثر ضدمیکروبی ندارد و چنانچه در اطراف دیسک هاله عدم رشد مشاهده شد دارای اثر ضدمیکروبی میباشد.
۳-۲-۱- باکتری های مورد مطالعه
باکترهای گرم مثبت شامل:
استافیلوکوکوس اورئوس (ATCC25923)
استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین (ATCC33591)
استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس (ATCC14990)
استرپتوکوکوس پیوژنز (ATCC19615)
باکتری گرم منفی شامل:
سودوموناس آئروژینوزا (ATCC27853)
۳-۲-۲- مواد و وسایل مورد نیاز
۱- ترازوی آنالیتیکال جهت وزن کردن عصاره
۲- ترازوی دیجیتال جهت وزن کردن محیط کشت
۳- محیط کشت مولر هینتون آگار مرک آلمان
۴- محیط کشت مولر هینتون براث شرکت Q LAB
۵- اتوکلاو جهت استریل کردن محیط و وسایل
۶- انکوباتور جهت گرما گذاری
۷- سرم فیزیولوژی
۸- حلال DMSO 10٪
۹- آب مقطر استریل
۱۰- پودرکلرور باریوم جهت تهیه استاندارد ۵/۰ مک فارلند
۱۱- اسید سولفوریک ۹۸٪ جهت تهیه استاندارد ۵/۰ مک فارلند
۱۲- الکل ۷۰٪ و ساولن برای ضد عفونی کردن سطح کار
۱۳- پلیت یک بار مصرف استریل ۸ و ۱۰ سانتیمتری
۱۴- لوپ استریل
۱۵-سواب استریل
۱۶- لوله آزمایش
۱۷- بشر
۱۸- ارلن ۵۰۰ و ۱۰۰۰ سی سی
۱۹- پیپت مدرج
۲۰- میکروپلیت ۹۶ خانهایی
۲۱- استوانه مدرج
۲۲- پیپت پاستور
۲۴- سمپلر و سر سمپلر ۱۰۰ و ۱۰۰۰ میکرولیتر
۲۵- یخچال
۲۶- آون
۲۷- هود لامینار
۲۸- جا لولهایی
۲۹- ماژیک، خط کش و برچسب
۳-۲-۳- استریل کردن مواد و وسایل
کلیه وسایل باید به صورت استریل مورد استفاده قرار گیرند. جهت استریل کردن وسایل شیشهایی از آون (حرارت خشک) به مدت ۳ ساعت در دمای ۲۰۰ درجه سانتی گراد استفاده گردید. جهت استریل کردن محیطهای کشت و محلولها نیز از اتوکلاو (حرارت مرطوب) به مدت ۱۵ دقیقه در دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد و فشار ۱۵ پوند بر اینچ مربع استفاده گردید. برای استریل کردن لولههای آزمایش درپیچدار و رکهای سمپلر، درب آنها را به حالت نیمه بسته قرار داده و سپس درون اتوکلاو قرار داده شد. کلیه کارهای میکروبی در کنار شعله و یا در زیر هود انجام گرفت. جهت استفاده از هود نیز ابتدا درون هود با الکل ۷۰ درصد کاملاً پاک شد و سپس درب هود بسته و لامپ اشعه ماوراء بنفش آن به مدت یک ساعت روشن گردید.
۳-۲-۴- محیط های کشت
۳-۲-۴-۱- محیط کشت مولر هینتون آگار[۴۴]
از این محیط جهت بررسی اولیه اثرات ضد باکتریایی با تکنیک انتشار چاهکی استفاده می شود.
مواد متشکله این محیط عبارتند از:
Beef, dehydrated infusion from 300g
Casein hydrolysate 17.5g
Starch 1.5g
