۱ min
۱ min

Final extention

۱

۷۲°c

۱۰ min

محصول PCR در دستگاه الکتروفورز با ژل آگارز ۲ درصد و به مدت ۶۰ دقیقه قرار داده شد، و پس از رنگ آمیزی به مدت ۱۵ دقیقه با رنگ فلورسنت SYBR safe ، زیر نور دستگاه تابش ماورای بنفش^[۶۶] مشاهده شد.
فصل چهارم
نتایج
۴-۱: نتایج روش های تشخیص عمومی
۴-۱-۱: نتایج نیاز غذایی
از تعداد ۳۰ نمونه کشت داده شده در حضور دیسک های نیاز غذایی تمام نمونه ها در حضور دیسک XV رشد داشت.
شکل ۴-۱: رشد باکتری در حضور دیسک XV و عدم رشد در حضور دیسک X و V
۴-۱-۲: نتایج رنگ آمیزی گرم
تعداد ۳۰ نمونه دریافت شده از بیمارستان میلاد تهران از طریق رنگ آمیزی گرم مورد بررسی قرار گرفت. در مشاهدات انجام شده در رنگ آمیزی گرم تمام نمونه ها کوکوباسیل گرم منفی تشخیص داده شد.
شکل ۴-۲: رنگ آمیزی گرم نمونه ها نشان دهنده کوکوباسیل های گرم منفی
۴-۲: نتایج آزمون PCR
۴-۲-۱: تایید هموفیلوس آنفلونزای کپسول دار بودن نمونه ها
ابتدا PCR توسط ست پرایمر A (HI1-HI2) انجام شد.
پرایمر HI-3 یک پرایمر داخلی بوده و منطقه ای درون محصول HI-1, HI2 را شناسایی می کند. این پرایمر به همراه HI-2 (ست پرایمر B)جهت تایید محصول ساخته شده توسط ست پرایمر A استفاده شد. برای این منظور محصول PCR اول به عنوان DNA الگو برای PCR دوم مورد استفاده قرار گرفت.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

این پرایمرها جایگاه ژن bexA موجود در منطقه I جایگاه تولید کپسول را شناسایی می کنند که در تمام سوش های کپسول دار هموفیلوس آنفلونزا (a-f) مشترک است و برای تولید کپسول ضروری می باشد (۲۶).
در هر بار تعداد ۵ نمونه به همراه کنترل مثبت و منفی در دستگاه PCR^[67] قرار داده می شد.
نکته: Streptococcus pneumonia به عنوان کنترل منفی و ATCC به عنوان کنترل مثبت در تمام تست ها استفاده شد.
در مجموع برای برای هر ست پرایمر ۶ مرحله واکنش PCR انجام شد.
نتایج به دست آمده از الکتروفورز محصولات PCR نشان دهنده این بودکه از ۳۰ نمونه دریافت شده تعداد ۱۲ نمونه فاقد ژن bexA و ۱۸ نمونه دارای این ژن بودند (جدول ۴-۳).
بر این اساس از ۳۰ نمونه دریافت شده فقط ۱۸ نمونه هموفیلوس آنفلونزا بود، ۱۲ نمونه دیگر سوش های بدون کپسول هموفیلوس آنفلونزا یا گونه های غیر از هموفیلوس بود.
۳۰۰۰
۱۰۰۰
۵۰۰
۱۰۰
۳۴۳ bp
۱ ۲ ۳ ۴ ۵ P N
۱۰۰۰
۳۰۰۰
۵۰۰
۱۰۰
۱۸۱ bp
شکل ۴-۳: نتایج PCR برای پرایمرهای ست پرایمر A (بالای تصویر) و ست پرایمر B (پایین تصویر)مربوط به نمونه های شماره ۱،۲،۳،۴،۵
۴-۲-۲: تایید تیپ b بودن نمونه ها
برای تایید تیپ b بودن نمونه ها ابتدا PCR توسط ست پرایمر C (b1-b2) انجام شد.